DiR(細胞膜深紅色熒光探針)親脂性熒光染料使用方法CAS號 ：100068-60-8

產品名稱 ：DiR(細胞膜深紅色熒光探針)

英文名稱 ：DiR

分子式 ： C63H101IN2 

分子量 ：1013.4

CAS號 ：100068-60-8

EX/EM:748nm/780nm

溶劑 ：DMSO

保存條件 ：2-8℃幹燥避光保存 ，長期保存建議零下 20℃ 

染料 DiR, DiO, DiD 和DiI是一類親脂性熒光染料家族 ，用於標記細胞膜和疏水性組織 。這是一類環境敏感型熒光染料 ，當它們與膜結合或者與親脂性生物分子(例如蛋白質 ，雖然在水中其熒光強度很弱)結合時 ，其熒光強度顯著增強 。它們具有很高的淬滅係數 ，偏光依賴性和很短的激發壽命 。一旦應用於細胞中 ，這種染料會在細胞內質膜中逐步擴散，導致在其最佳濃度條件下 ，將整個細胞染色 。 
它們不同的熒光顏色 ：DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光） 、DiD（紅色熒光） 、DiR（深紅色熒光） ，為活細胞多色彩熒光成像分析和流式細胞術提供了一種便捷的工具 。DiO和DiI可以分別與標準的FITC和TRITC濾光器一同使用 ，其中 ，DiO可以被633 nm He-Ne激光激發 ，並且具有比DiI更長的激發和發射光波長 ，為標記細胞和組織的那些本身就具有本底熒光的染料提供了非常卓越的替代品 。 
DiR在活體成像或者示蹤中非常有用 ，因為它們所發射的紅外光可以高效地穿過細胞和組織 ，並且在紅外光範圍內 ，其本底熒光水平很低 。

使用方法 ：
1.DiD ，DiO ，DiI ，DiR細胞膜染色液製備
(1)配置DMSO或EtOH 儲存液 ：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM 。
注意 ：未使用的儲存液保存在-20 oC ，避免反複凍融。
(2)工作液製備 ：用合適的緩衝液(如 ：無血清培養基 ，HBSS或PBS)稀釋儲存液 ，配製濃度為1～5 µM的工作液 。
注意 ：工作液的最終濃度是根據不同細胞和實驗的經驗來配製 。可以從推薦濃度的十倍以上尋找最佳條件 。
2.懸浮細胞染色
(1)懸浮細胞密度為 1 × 106/mL加入到工作液中 。
(2)在37 ℃培養細胞 2～20分鍾 ，不同的細胞最佳培養時間不同 。
(3)染色細胞試管在1000～1500轉離心5分鍾 。
(4)傾倒上清液 ，再次緩慢加入預溫37℃的培養液 。
(5)重複(3) ，(4)步驟兩次以上 。
3.粘壁細胞的染色
(1)使粘壁的細胞在無菌實驗室培養 。
(2)從培養基中移走蓋玻片 ，吸走過量培養液 ，將蓋玻片放在潮濕的環境中 。
(3)在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液 ，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細胞 。
(4)在37 ℃培養細胞 2～20分鍾 ，不同的細胞最佳培養時間不同 。
(5)吸幹染料工作液 ，用培養液洗蓋玻片2～3次 ，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞 ，培養5～10分鍾 ，然後吸幹培養基 。
4.流式細胞儀的檢測
DiO 、DiI 、DiD 、DiR染色的細胞可以分別用經典的FL1 ，FL2 ，FL3和FL4流式細胞儀檢測 。

檢測條件 ：
(1) DiR工作液濃度 ：5µM

(2) 染色條件 ：貼壁細胞 ：37 ℃染色工作液孵育細胞20分鍾 ，用培養液洗2次 ，每次用預溫的培養基覆蓋所有細胞 ，培養10分鍾。 懸浮細胞：37 ℃染色工作液孵育細胞20分鍾 ，1000～1500轉離心5分鍾 ，傾倒上清液 ，再次緩慢加入預溫37℃的培養液 ，重複兩次 。

(3) 檢測儀器 ：小動物活體成像儀（VILBER, FUSION FX） ；Ex/Em=750/850nm